高纯度质粒大量快速提取试剂盒

产品信息：

保存条件：收到本产品后按照上面指示温度存放各成份，储存 18 个月不影响使用效果。

产品介绍：

本试剂盒采用改进 SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低

pH 值状态下选择性地结合溶液中的质粒 DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其

它细菌成分去除，最后通过低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净质粒 DNA 从硅基质膜

上洗脱。

产品特点：

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可

重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，从 100-200ml 大肠杆菌 LB 培养液中，可快速

提取 0.2-0.5mg 高质量的高拷贝质粒 DNA，提取率达 80 %左右。

3.获得的质粒产量高、超螺旋构象比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、

试剂盒组成 保存

DP107-01

10 次

平衡液 BL 室温 15ml

RNase A（10mg/ml） -20℃ 1ml

溶液 P1 4℃ 100ml

溶液 P2 室温 100ml

溶液 P3 室温 100ml

3M 乙酸钠 室温 1ml

去蛋白液 PD 室温 100ml

漂洗液 WB 室温

25ml×2

第一次使用前加入 100ml 无水乙醇

洗脱缓冲液 EB 室温 15ml

吸附柱 AC 室温 10 个

收集管（50ml） 室温 10 个

体外转录和测序等各种分子生物学实验。

注意事项：

1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的 RNase A 加入溶液 P1 后（终浓度 100μg/ml）

置于 4℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的质粒可能会有微量 RNA 残留，

在溶液 P1 中补加 RNase A 即可。

2.环境温度低时溶液 P2 中 SDS 会析出出现浑浊或者沉淀，可在 37℃水浴加热几分钟，

即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成大量的泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化。

4.溶液 P3 和去蛋白液 PD 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、

眼睛和衣服。若沾染皮肤或眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质

粒或大于 10kb 的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加 P1、P2、P3 的用量，

洗脱缓冲液应在 70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，提高提取效率。

6.得到的质粒 DNA 可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260

值为 1 相当于大约 50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为 2 条或者多条 DNA

条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间

长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超

过 90%。

7.洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，

但应该确保 pH 大于 7.5，pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱，质粒应该保存-20℃。

质粒 DNA 如果需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，

pH 8.0），但是 EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

自备试剂：无水乙醇

操作步骤：

提示：

 第一次使用前请先在漂洗液 WB 瓶中加入指定无水乙醇，充分混匀，加入后请及

时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

 将 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混匀。每次使用后置于 2-8℃保存。

 将溶液 P3 放在冰上预冷。

1. 可选步骤：向吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）加 1ml 平衡液 BL，12,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

2.取 100-300ml 过夜培养的菌液，12,000rpm 离心 3 min，尽可能的倒干上清，收集菌

体。

3.用 10ml 溶液 P1 重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。

4.加 10ml 溶液 P2，温和地上下翻转 4 -7 次使菌体充分裂解，室温放置 4 min。

5.加 10ml 溶液 P3，立即温和地上下翻转 4 -7 次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。

冰上静置 5 min，4℃条件下 12,000rpm 离心 10 min，小心取上清，避免吸取到漂浮的

白色沉淀。

6.取上清加入新的离心管（自备）中，向上清中加入 11 ml 异丙醇，上下颠倒混匀。

7.将上一步 6 中的混合溶液加入吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），静置 2 min，

12,000rpm 离心 2 min，倒掉收集管中的废液。

注意：吸附柱的最大容积为 15ml， 所以第 5 步中所得溶液分多次过柱。如果离心机

转子倾角较大时，建议加入吸附柱的溶液体积不超过 10ml ，以防发生漏液现象。

8.加入 10ml 去蛋白液 PD，12,000rpm 离心 2 min，弃掉废液。

9.加入 10ml 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心 2 min，弃

掉废液。

10.重复操作步骤 9。

11.将吸附柱 AC 放回空收集管中，最高速（最好大于 12,000rpm，如果离心机转速低，

需要相应延长离心时间）离心 5 min，去除基质膜上的乙醇残留，用枪头吸除内圈压环

和柱壁之间可能残留的乙醇，室温或者烘箱晾干几分钟。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反

应（酶切、PCR 等）。

12.取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 1ml 洗脱缓冲

液 EB（事先在 65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置 2 min，12,000rpm 离心 5 min。

需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心 2 min。（注意：洗脱

液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用 ddH2O 做洗脱液应保证其 pH 值在 7.5-8.0

围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率。洗脱缓冲液用量的多少主要是依据质粒的拷贝

数以及实验所需要的浓度来确定。洗脱缓冲液体积不少于 1 ml，体积过小影响回收效

率。DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。）

可选步骤（如果需要更高浓度的质粒，可进行如下操作）：

13.上述 1ml 洗脱液分两管，每 0.5 ml 洗脱液加入 1 ml 无水乙醇以及 50μl 3M 乙酸钠，

混匀, -20℃放置 1 小时，12,000 rpm 离心 10 min，小心弃上清。

14.加入 0.5 ml 的 70%乙醇洗涤沉淀, 室温 12,000 rpm 离心 5 min，小心弃乙醇。

15.重复操作步骤 14。

16.空气中干燥沉淀约 5-10 min, 根据需要用适当体积（一般 100μl）的缓冲液 EB 溶解

沉淀。-- BM220424