新海生物科技股份有限公司 1 / 4 qPCR Mix 试用装 （一）TaqMan Master Mix 1、货号：NH9201（EzPlex SNP Genotyping Master Mix） 1）反应体系 2）反应条件 2、 货号：NH9246（NuHi® U+ TaqMan Master Mix（ROX free）） 1）反应体系 2）反应条件 组分 用量（25μL/反应） 终浓度 EzPlex SNP Genotyping Master Mix（2×） 12.5 µL 1× 上游引物（浓度25μM）* 0.5-1µL 200-400nM* 下游引物（浓度25μM）* 0.5-1µL 200-400nM* PCR探针(25μM) * 0.2µL 200nM* 模板 1µL 1-100ng 灭菌水 补齐至 25µL / 步骤 温度 时间 预变性 95℃ 10分钟 40-50 PCR 循环 变性 95℃ 5秒 退火/延伸 60℃ 40秒 组分 用量（25μL/反应） 终浓度 NuHi® U+ TaqMan Master Mix（ROX free）(ROX free) 12.5 µL 1× 上游引物（浓度10μM）* 0.5-1µL 200-400nM* 下游引物（浓度10μM）* 0.5-1µL 200-400nM* 探针 * 0.5-1µL 200-400nM* DNA模板 1µL 1-100ng 灭菌水 补齐至 25µL / 步骤 温度 时间 预变性 95℃ 10分钟 40-50PCR 循环 变性 95℃ 5秒 退火/延伸 60℃ 40秒

新海生物科技股份有限公司 2 / 4 （二）NuHi® SNP Mix 1、货号：NH9216（NuHi® SNP Mix） 1）反应体系 2）反应条件 （三）NuHi® Ez Advanced SNP Mix(ROX free) 1、货号：NH9240（NuHi® Ez Advanced SNP Mix(ROX free)） 1）反应体系 组分 用量（25μL/反应） 终浓度 NuHi® SNP Mix（2×） 12.5 µL 1× 上游引物（浓度10μM）* 1.25µL 500nM* 下游引物（浓度10μM）* 1.25µL 500nM* 等位基因1探针(10μM) * 0.5µL 200nM* 等位基因2探针(10μM) * 0.5µL 200nM* DNA模板 1µL 1-100ng 灭菌水 补齐至 25µL / 步骤 温度 时间 预变性 95℃ 10分钟 40-50 PCR 循环 变性 95℃ 10秒 退火/延伸 60℃ 40秒 组分 用量（25μL/反应） 终浓度 NuHi® Ez Advanced SNP Mix(ROX free)（2×） 12.5 µL 1× 上游引物（浓度25μM）* 0.5µL 500nM* 下游引物（浓度25μM）* 0.5µL 500nM* 等位基因1探针(25μM) * 0.2µL 200nM* 等位基因2探针(25μM) * 0.2µL 200nM* 模板 1-5µL 1-100ng 灭菌水 补齐至 25µL /

新海生物科技股份有限公司 3 / 4 2）反应条件 2、货号：NH9239（NuHi® U+ Ez Advanced SNP Mix(ROX free)） 1）反应体系 2）反应条件 步骤 温度 时间 热启动 95℃ 10分钟 45 PCR 循环 变性 95℃ 10秒 退火/延伸 60℃ 40秒 组分 用量（25μL/反应） 终浓度 NuHi® U+ Ez Advanced SNP Mix(ROX free)（2×） 12.5 µL 1× 上游引物（浓度25μM）* 0.5µL 500nM* 下游引物（浓度25μM）* 0.5µL 500nM* 等位基因1探针(25μM) * 0.2µL 200nM* 等位基因2探针(25μM) * 0.2µL 200nM* 模板 1µL 1-100ng 灭菌水 补齐至 25µL / 步骤 温度 时间 预变性 95℃ 10分钟 45 PCR 循环 变性 95℃ 10秒 退火/延伸 60℃ 40秒

新海生物科技股份有限公司 4 / 4 （四）NuHi® Ez Advanced U+ SNP Mix-AP 1、货号：NH9261（NuHi® Ez Advanced U+ SNP Mix-AP） 1）反应体系 2）反应条件 组分 用量（25μL/反应） 终浓度 NuHi® Ez Advanced U+ SNP Mix-AP（2×） 12.5 µL 1× 上游引物（浓度25μM）* 0.5-1µL 200-400nM* 下游引物（浓度25μM）* 0.5-1µL 200-400nM* PCR探针(25μM) * 0.2µL 200nM* 模板 1-5µL 0.05-100ng 灭菌水 补齐至 25µL / 步骤 温度 时间 预变性 95℃ 30秒-5分钟 40-50 PCR 循环 变性 95℃ 5-15秒 退火/延伸 60℃ 30-45秒