2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322·专题研究:中医药调节肿瘤微环境相关研究·*基金项目:中国中医科学院科技创新工程“中药药性学学科”重大攻关项目(CI2021A03809) ;国家自然科学基金面上项目(82074398) ;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(YZX202407) ;中国中医科学院科技创新工程项目中医理论传承与创新专项项目(KYG－202406)藤梨根调控IL－17信号通路影响胃癌细胞迁移与凋亡*曹洋1，董博2，刘莹3，岳广欣4，申力41．陕西中医药大学，陕西 咸阳712046;2．西安交通大学附属红会医院，陕西 西安710054;3．中国中医科学院中药研究所，北京100700;4．中国中医科学院中医基础理论研究所，北京100700摘要:目的:采用网络药理学和细胞实验探讨藤梨根(Tengligen，TLG)调控白细胞介素(interleukin，IL)17信号通路治疗胃癌的作用机制。方法:通过中医药整合药理学研究平台(IntegrativePharmacologybasedＲesearchPlatformofTraditionalChineseMedicine，TCMIP)筛选藤梨根的活性成分和靶点，借助GeneCards、Uniprot数据库查找胃癌的靶点，并利用Venny2．1．0获取两者的交集靶点。将交集靶点导入STＲING数据库，构建蛋白质蛋白质相互作用(proteinproteininteraction，PPI)网络。通过Cytoscape3．10．1软件进行网络拓扑学分析，根据Degree值筛选核心靶点。利用DAVID数据库进行基因本体(GeneOntology，GO)和京都基因与基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG)富集分析。将25只SD大鼠随机分为空白组5只和藤梨根组(0．3125g·kg1)20只，连续灌胃5d，制备空白血清和含药血清。将HGC－27细胞分为对照组、空白血清组、12%藤梨根含药血清组(TLG－L)、24%藤梨根含药血清组(TLG－M)及48%藤梨根含药血清组(TLG－H) ，采用Transwell实验检测细胞的迁移能力，流式细胞仪检测细胞凋亡，ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子－α(tumornecrosisfactor－α，TNF－α)、IL－6、IL－1β含量，Westernblot法检测IL－17A、核转录因子－κB(nucleartranscriptionfactor－κB，NF－κB)、基质金属蛋白酶－9(matrixmetalloproteinase－9，MMP－9)蛋白表达水平。结果:藤梨根靶点159个，胃癌靶点1010个，两者的交集靶点95个。藤梨根治疗胃癌的核心靶点包括肿瘤蛋白p53(tumorprotein53，TP53)、IL－6、B淋巴细胞瘤－2(B－celllymphoma－2，BCL2)、MMP－9、TNF等。KEGG分析得到123条通路，包括IL－17信号通路、PI3K－Akt信号通路、HIF－1信号通路等。与空白血清组比较，TLGL组、TLGM组、TLGH组细胞迁移数目减少、细胞凋亡率升高(P＜0．01)。与对照组比较，空白血清组细胞上清液中TNFα、IL6含量升高(P＜0．01)。与空白血清组比较，TLGL组、TLGM组、TLGH组细胞上清液中IL1β、TNFα、IL6含量升高(P＜0．01)。与对照组比较，空白血清组细胞MMP9蛋白表达水平降低(P＜0.01)。与空白血清组比较，TLGM组、TLGH组细胞IL17A、NFκB、MMP9蛋白表达水平降低(P＜0．05)。结论:藤梨根可能通过槲皮素、β谷甾醇、谷固醇等成分，调控IL17信号通路，从而发挥抑制胃癌细胞迁移，并促进其凋亡的作用。关键词:藤梨根;胃癌;HGC27细胞;IL17通路;网络药理学;槲皮素;细胞迁移;细胞凋亡DOI:10．16368/j．issn．16748999．2025．03．075中图分类号:Ｒ2855文献标志码:A文章编号:1674－8999(2025)03－0465－09Tengligen(ＲadixActinidiaeChinensis)AffectingGastricCancerCellMigrationandApoptosisbyModulatingIL－17SignalingPathwayCAOYang1，DONGBo2，LIUYing3，YUEGuangxin4，SHENLi41．ShaanxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，XianyangShaanxiChina712046;2．ＲedCrossHospital，Xi'anJiaotongUniversity，Xi'anShaanxiChina710054;3．InstituteofTraditionalChineseMedicine，ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，BeijingChina100700;4．InstituteofBasicTheoryofChineseMedicine，ChinaAcademyofChineseMedicalSciences，BeijingChina100700·465·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322Abstract:Objective:ToexplorethemechanismofactionofTengligen(TLG)inregulatinginterleukin(IL)17signalingpathwayintreatmentofgastriccancerbyusingnetworkpharmacologyandcellularexperiments．Methods:TheactivecomponentsandtargetsofTengligen(TLG)werescreenedbyIntegrativePharmacologybasedＲesearchPlatformofTraditionalChineseMedicine(TCMIP) ，andtheactivecomponentsandtargetsofTLGwereidentifiedbyGeneCards，Uniprotdatabasetofindthetargetsofgastriccancer，andutilizedVenny210toobtaintheintersectingtargetsofthetwoTheintersectingtargetswereimportedintotheSTＲINGdatabasetoconstructaprotein－proteininteraction(PPI)network．ThenetworktopologywasanalyzedbyCytoscape3．10．1software，andthecoretargetswerescreenedaccordingtotheDegreevalue．GeneOntology(GO)andKyotoEncyclopediaofGenesandGenomes(KEGG)enrichmentanalyseswereperformedusingtheDAVIDdatabase．Twenty－fiveSDratswererandomlydividedinto5intheblankgroupand20intheTengligengroup(0．3125g·kg1) ，andtheblankserumanddrug－containingserumwerepreparedbyconsecutivegastricgavagefor5d．ThecellsofHGC－27cellsweredividedintocontrolcellsandHGC－27cells．Tumornecrosisfactor－α(TNF－α) ，IL－6andIL－1βweredetectedinthesupernatantwithELISA，andIL－17A，nucleartranscriptionfactor－κB(NF－κB) ，matrixmetalloproteinase－9(matrix－κB) ，IL－1β，NF－κB，matrixmetalloproteinase－9(MMP－9)proteinexpressionlevelweredetectedwithWesternblot．Ｒesults:Therewere159targetsofGarciniacambogia，1010targetsofgastriccancer，and95intersectingtargetsofboth．ThecoretargetsofTengligenforgastriccancertreatmentincludedtumorprotein53(TP53) ，IL6，Bcelllymphoma2(BCL2) ，MMP9，TNF，etc．KEGGanalysisyielded123pathways，includingIL17signalingpathway，PI3KAktsignalingpathway，HIF1signalingpathway，etc．Comparedwiththeblankserumgroup，thenumberofcellmigrationwasreduced，andtheapoptosisratewasincreasedintheTLGL，TLGMandTLGHgroups(P＜0．01)．Comparedwiththecontrolgroup，TNFαandIL6contentinthecellsupernatantoftheblankserumgroupwaselevated(P＜0．01)．Comparedwiththeblankserumgroup，thecontentofIL1β，TNFαandIL6inthecellsupernatantofTLGL，TLGMandTLGHgroupswaselevated(P＜0．01)．Comparedwiththecontrolgroup，thelevelofMMP－9proteinexpressioninthecellsoftheblankserumgroupwasreduced(P＜0．01)．Comparedwiththeblankserumgroup，thecellularIL－17A，NF－κBandMMP－9proteinexpressionlevelswerereducedintheTLG－MandTLG－Hgroups(P＜0．05)．Conclusion:TengligenmayregulateIL－17signalingpathwaythroughquercetin，β－sitosterol，andglutathione，thusexertingtheeffectsofinhibitingmigrationandpromotingapoptosisofgastriccancercells．Keywords:Tengligen(Ｒadixactinidiaechinensis) ;gastriccancer;HGC－27cells;IL－17pathway;networkpharmacology;quercetin;cellmigration;cellapoptosis胃癌作为一种全球范围内常见的恶性肿瘤，其年新发病例数约为100万例，我国胃癌的发病人数和死亡人数分别占全球的44．0%和48．6%［1］。尽管手术、化疗、靶向治疗、免疫检查点抑制剂等多种治疗方案不断更新与发展，对胃癌患者大有裨益，但患者的5年生存率仅为35．1%，且预后欠佳［2］。中医药在控制胃癌的侵袭转移，实现减毒增效、延长生存期、提高胃癌患者生活质量等方面发挥重要作用［3］。藤梨根，又称猕猴桃根，为猕猴桃科猕猴桃属植物中华猕猴桃(ActinidiachinensisPlanch．)的干燥根，具有清热解毒、活血消肿、祛风利湿的功效，是治疗胃肠肿瘤的代表性药物。前期研究表明，藤梨根有效成分可抑制胃癌BGC－823、MKN－7、MGC803和SGC－7901细胞的迁移，诱导细胞凋亡［4］。猕猴桃根多糖可抑制小鼠胃癌腋下瘤的生长及皮下荷瘤的进展，同时抑制胃癌细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化［5］。藤梨根的有效成分熊果酸可通过抑制胃癌细胞上皮间质转化，有效遏制细胞的增殖和迁移［6］。藤梨根可通过下调B细胞淋巴瘤/白血 病－2(B－celllymphoma/leukemia－2，Bcl2)、核转录因子κBp65(nuclearfactorκBp65，NFκBp65)以及基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase－9，MMP－9)蛋白表达，上调半胱氨酸蛋白酶3(cysteineprotease3，Caspase3)蛋白表 达，抑制磷脂酰肌醇3－激 酶/蛋 白 激 酶B(phosphoinositide3kinase/proteinkinaseB，PI3K/Akt)信号通路，从而改善肿瘤微环境中的炎症细胞、炎症因子和趋化因子状态，发挥抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡及激发细胞失巢凋亡等作用［7］。因此，本研究通过网络药理学和细胞实验验证，探索藤梨根水煎液治疗胃癌的作用机制，为藤梨根在胃癌临床治疗中的应用提供依据。1材料1．1动物SPF级SD雄性大鼠25只，6～8周龄，体质量(200±20)g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，实验动物生产许可证号:SCXK(京)2019－0010，动物饲养于中国中医科学院中医基础理论研究所动物房。本实验由中国中医科学院中医基础理论研究所伦理委员会审核批准，伦理批号:IBTCMCACMS21－2403－07。1．2细胞人胃癌细胞株HGC27购自武汉普诺赛生命科技有限公司，货号:CL－0107。·466·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．3221．3主要试剂藤梨根(浙江中医药大学中药饮片厂有限公司，批号:221101) ;HGC27细胞专用培养基(武汉普诺赛生命科技有限公司，货号:CM－0107) ;CCK8试剂盒、结晶紫染色液(北京索莱宝科技有限公司，货号:CA1210、G1061) ;AnnexinV－FITC细胞凋亡检测试剂盒(碧云天生物技术有限公司，货号:C1062L) ;人白细胞介素(interleukin，IL)6ELISA试剂盒(江苏酶免实业有限公司，货号:MM－0049H2) ;IL－17a抗体、NF－κBp65抗体、MMP－9抗体(武汉三鹰生物技术有限公司，货号:261631－AP、10745－1－AP、10375－2－AP) ;无蛋白快速封闭液、快速转膜液、预染彩虹蛋白marker、5×蛋白上样缓冲液、BCA蛋白定量/体积分数测定试剂盒、蛋白酶抑制剂混合物、ＲIPA裂解液、飞克特超敏ECL发光液(大连美仑生物科技有限公司，货号:MA0406、MA0121－2、MA0342－1、MA0003、MA0082－2、MB2678－1、MA0152、MA0186－2)。1．4仪器多功能提取罐(上海达程有限公司，型号:DC－NSG－130) ;旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司) ;冷冻干燥机(美国SP公司，型号:AD2．0EL) ;凝胶成像系统、电泳仪(美国伯乐生命医学产品有限公司，型号:8187、PowerPacBasic) ;酶标仪(美国赛默飞世尔科技公司，型号:3020199)。2方法2．1网络药理学方法2．1．1藤梨根治疗胃癌的潜在靶点预测通过中医药整合药理学研究平台(IntegrativePharmacology－basedＲesearchPlatformofTraditionalChineseMedicine，TCMIP)筛选藤梨根的活性成分及相关靶点。通过GeneCards(https://www．genecards．org)、Uniprot数据库(https://www．uniprot．org)查找胃癌的疾病靶 点，利 用Venny2．1．0在 线 工 具(https://bioinfogp．cnb．csic．es/tools/venny/index．html)将藤梨根靶点与胃癌靶点取交集，得到共同靶点进行下一步分析。2．1．2藤梨根治疗胃癌的核心靶点筛选将胃癌与藤梨根的交集靶点导入STＲING数据库(https://string－db．org/) ，构建蛋白质－蛋白质相互作用(proteinproteininteraction，PPI)网络，设置物种为“Homosapiens”，最低相互作用阈值为0．900，保存结果为TSV格式输出。将PPI网络导入Cytoscape3．10．1软件(http://www．cytoscape．org/)进行网络拓扑学分析，按照Degree值(靶点之间的连接度)进行排序，筛选核心靶点。2．1．3基因本体(GeneOntology，GO)和京都基因与基因组百科全 书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes，KEGG)富集分析将交集靶点输入DAVID数据库中，分析生物过程(biologicalprocess，BP)、细胞组分(cellcomponent，CC)、分子功能(molecularfunction，MF)及KEGG信号通路。按照P＜0．05进行筛选，将Count值排名前10位的结果导入微生信分析平台(http://www．bioinformatics．com．cn)绘制气泡图。将藤梨根活性成分、核心靶点、重要通路等导入Cytoscape3．10．1软件，构建“活性成分靶点通路－疾病”网络。2．2细胞实验方法2．2．1药物制备藤梨根饮片加入12倍水浸泡1h，采用多功能提取罐提取1h，重复提取2次，合并滤液。于旋转蒸发仪浓缩药液至质量体积分数为2g·mL－1，4000r·min－1离心20min去除杂质，取上清。减压浓缩，冷冻干燥。每克藤梨根水提物对应14．1g藤梨根饮片，将藤梨根水提物加入适量蒸馏水溶解。2．2．2含药血清制备将25只SD大鼠随机分为空白组5只和藤梨根组20只(0．3125g·kg－1) ，每日灌胃1次，连续5d。末次灌胃1h后，使用戊巴比妥钠 麻 醉 大 鼠，腹 主 动 脉 取 血，静 置2h，4℃3500r·min－1离心15min，取上清，放于－80℃冰箱保存。2．2．3细胞培养使用ＲPMI1640、20%FBS及1%P/S配成的完全培养基培养HGC－27细胞，隔天换液。当 细 胞 长 到80%时，胰 酶 消 化1min，1200r·min－1离心3min，进行传代。2．2．4CCK－8法检测细胞活性取生长状态良好的HGC27细胞接种于96孔板上，每孔5×104个细胞，24h后分别加入10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%及100%藤梨根含药血清，并设置空白孔与对照孔。培养24h后，每孔加入10μLCCK－8溶液，继续培养1h、1．5h、2h后，用酶标仪测定450nm处的光密度值。2．2．5细胞分组及给药将HGC27细胞分为对照组(含20%FBS的完全培养基)、空白血清组(含20%空白血清的完全培养基)、12%藤梨根含药血清组(TLGL)、24%藤梨根含药血清组(TLGM)及48%藤梨根含药血清组(TLG－H)。2．2．6Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力在6孔 板 中 接 种1×105个HGC－27细 胞 培 养24h，按上述分组干预24h后，用 不 含 血 清 的·467·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322DMEM培养基调整细胞密度为25×107mL1。Transwell上室加入100μL细胞悬液，Transwell下室加入500μL完全培养基，37℃培养箱培养24h、48h。培养后弃去培养基，PBS漂洗2次，将500μL4%多聚甲醛加入下室固定15min，PBS漂洗3次，加入0．1%结晶紫染色10min，PBS漂洗3次洗去结晶紫。用湿润的棉签轻轻擦拭上室除去多余的结晶紫，晾干后在显微镜下观察并随机选取3个视野进行拍照。2．2．7流式细胞术检测细胞凋亡将HGC27细胞接种于6孔板上，每孔1×105个细胞，培养24h后根据上述分组干预24h，收集细胞。取5万～10万个重悬的细胞，加入195μLAnnexinV－FITC结合液、5μLAnnexinV－FITC及10μL碘化丙啶染色液混匀，室温避光孵育10～20min，立即用流式细胞仪检测。2．2．8ELISA法检测细胞上清中TNF－α、IL－6、IL－1β含量将HGC－27细胞接种于6孔板上，每孔1×105个细胞，培养24h后根据上述分组干预24h，取细胞上清。根据ELISA检测试剂盒说明书进行操作，并于450mm波长处测定各孔光密度值。2．2．9Westernblot法检测细胞IL17A、NFκB、MMP－9蛋白表达水平将HGC－27细胞接种于6孔板上，每孔1×105个细胞，培养24h后根据上述分组干预24h，收集细胞进行裂解并提取蛋白。采用BCA法测定蛋白体积分数，95℃加 热10min，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后转移到聚偏二氟乙烯(polyvinylidenedifluoride，PVDF)膜上，在室温下用无蛋白快速封闭液封闭10min。加 入IL－17A(1∶2000)、NF－κB(1∶2000)、MMP－9(1∶2000)一抗，TBST洗涤5次，每次5min;室温孵育二抗1h，TBST洗涤3次，每次5min。用ECL显影液在ChemiDocXＲS+凝胶成像系统中进行显影和成像。获得图像后，用ImageJ软件进行分析。2．2．10统计学方法采用SPSS27．0软件分析数据，计量资料以均数±标准差(x ±s)表示。若数据服从正态分布，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较若方差齐时采用LSD检验，方差不齐采用Tamhane's检验;若数据不服从正态分布，采用非参数检验。P＜0．05表示差异具有统计学意义。3结果3．1网络药理学研究结果3．1．1藤梨根的主要活性成分及作用靶点利用TCMIP数据库筛选出藤梨根主要活性成分为槲皮素、β－谷甾醇、谷固醇、芦荟大黄素、儿茶素、表儿茶素等，潜在靶点159个。3．1．2藤梨根与胃癌的交集靶点通 过GeneCards、Uniprot数据库得到胃癌靶点1010个，其与藤梨根的交集靶点95个，见图1。图1藤梨根与胃癌交集靶点韦恩图3．1．3藤梨根治疗胃癌的核心靶点PPI网络包括95个节点和1932条边，平均节点度为40．7，平均局部聚类系数为0．747。藤梨根治疗胃癌的核心靶点包括肿瘤蛋白p53(tumorprotein53，TP53)、IL－6、B淋巴 细 胞 瘤－2(B－celllymphoma－2，BCL2)、MMP9、TNF等，见图2。图2PPI网络图3．1．4GO和KEGG富集分析GO富集分析得到640条BP，主要包括基因表达的正调控、对外源性刺激的反应、转录的正调控、DNA模板化等;60条CC，主要包括细胞外空间、高分子复合物、细胞核等;20条MF，主要包括酶结合、相同的蛋白质结合、蛋白质结合等。KEGG分析共得到123条通路，与胃癌细胞凋亡与迁移最相关的通路包括IL－17信号通路、PI3K－Akt信号通路、HIF－1信号通路等，见图3。“活性成分靶点通路疾病”网络见图4。·468·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322注:A．BP;B．CC;C．MF;D．KEGG通路。图3GO和KEGG富集分析气泡图图4“活性成分－靶点－通路－疾病”网络图·469·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．3223．2细胞实验结果3．2．1藤梨根对HGC－27细胞活力的影响不同体积分数的藤梨根含药血清处理HGC－27细胞后，细胞存活率下降，并且随着藤梨根含药血清体积分数升高，细胞存活率逐渐下降，见图5、表1。藤梨根含药血清体积分数的IC50值为48%，据此将其作为后续药物干预的高体积分数。图5藤梨根对HGC－27细胞存活率的影响表1藤梨根对HGC27细胞活性的影响(x±s)含药血清体积分数n细胞存活率/%10%893．85±0．0520%888．76±0．0230%877．27±0．0340%863．21±0．0250%854．71±0．0360%84607±00470%843．01±0．0480%835．28±0．0290%833．49±0．03100%830．16±0．023．2．2藤梨根对HGC27细胞迁移能力的影响对照组与空白血清组细胞迁移数目比较，差异无统计 学 意 义(P＞0．05)。与 空 白 血 清 组 比 较，TLG－L组、TLG－M组、TLG－H组细胞迁移数目减少(P＜0．01) ，见图6、表2。注:A．对照组;B．空白血清组;C．TLG－L组;D．TLG－M组;E．TLG－H组。图6各组HGC－27细胞迁移实验图表2各组HGC－27细胞迁移数目比较(x±s)组别n细胞迁移数目/个对照组31046．00±32．14空白血清组31019．00±60．46TLGL组362190±11600＊＊TLG－M组3339．90±8．35＊＊TLGH组3162．50±9．65＊＊注:与空白血清组比较，*P＜0．05，＊＊P＜0．01。3．2．3藤梨根对HGC27细胞凋亡的影响对照组与空白血清组细胞凋亡率比较，差异无统计学意义(P＞0．05)。与空白血清组比较，TLGL组、TLG－M组、TLG－H组细胞凋亡率升高(P＜0.01) ，见图7、表3。表3各组HGC－27细胞凋亡率比较(x±s)组别n细胞凋亡率/%对照组317．83±0．65空白血清组319．37±0．42TLGL组330．90±1．83＊＊TLGM组340．87±0．93＊＊TLG－H组348．67±0．74＊＊注:与空白血清组比较，*P＜0．05，＊＊P＜0．01。3．2．4藤梨根对HGC－27细胞上清液中IL－1β、TNFα、IL6含量的影响与对照组比较，空白血清组细胞上清液中TNF－α、IL－6含量升高(P＜0．01)。与空白血清组比较，TLGL组、TLGM组、TLG－H组细胞上清液中IL－1β、TNF－α、IL6含量升高(P＜0．01) ，见表4。注:A．对照组;B．空白血清组;C．TLGL组;D．TLGM组;E．TLGH组。图7各组HGC27细胞凋亡流式图·470·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322表4各组HGC27细胞上清液中IL1β、TNFα、IL6含量比较(x±s)组别nIL1β(ρ/ng·L1)TNFα(ρ/μg·L1)IL6(ρ/μg·L1)对照组34．98±0．490．80±0．130．37±0．02空白血清组35．61±0．85427±052##167±010##TLGL组38．67±0．52＊＊7．42±0．92＊＊3．05±0．17＊＊TLGM组39．34±0．83＊＊9．43±0．76＊＊4．93±0．24＊＊TLG－H组310．23±0．50＊＊11．67±0．93＊＊6．65±0．53＊＊注:与对照组比较，#P＜0．05，##P＜0．01;与空白血清组比较，*P＜0．05，＊＊P＜0．01。3．2．5藤梨根对HGC－27细胞IL－17A、NF－κB、MMP9蛋白表达水平的影响Westernblot显示，与对照组比较，空白血清组细胞MMP－9蛋白表达水平降低(P＜0．01)。与空白血清组比较，TLG－L组细胞NF－κB蛋白表达水平降低(P＜0.05)。与空白血清组比较，TLGM组、TLGH组细胞IL－17A、NF－κB、MMP－9蛋白表达水平降低(P＜0．05) ，见图8、表5。表5各组HGC－27细胞IL－17A、NF－κB、MMP－9蛋白表达水平比较(x±s)组别nIL17A/βactinNFκB/βactinMMP9/βactin对照组31．36±0．031．34±0．031．19±0．02空白血清组31．07±0．081．22±0．020．89±0．03##TLG－L组30．68±0．060．88±0．02*0．87±0．03TLG－M组30．55±0．22*0．71±0．10＊＊0．70±0．02＊＊TLG－H组30．40±0．01＊＊0．70±0．156＊＊0．73±0．03＊＊注:与对照组比较，#P＜005，##P＜001;与空白血清组比较，*P＜005，＊＊P＜001。注:A．对照组;B．空白血清组;C．TLGL组;D．TLGM组;E．TLGH组。图8各组HGC27细胞IL17A、NFκB、MMP9蛋白条带图4讨论藤梨根具有解毒抗癌的功效，临床中常用于治疗胃癌。本研究采用网络药理学和体外实验的方法探讨藤梨根通过调控IL－17信号通路，影响胃癌细胞凋亡与迁移的作用机制。Transwell实验及流式细胞术检测显示，藤梨根能够抑制HCG－27胃癌细胞迁移，促进其凋亡。网络药理学研究表明，藤梨根的主要活性成分为槲皮素、芦荟大黄素、β－谷甾醇、谷固醇、儿茶素、表儿茶素等，藤梨根治疗胃癌的核心靶点为IL6、MMP9、TNF、IL1β等，其作用机制可能与调控IL－17、PI3K－Akt、HIF－1信号通路有关。据此，本研究主要对上述核心靶点和关键信号通路进行验证。研究表明，槲皮素通过靶向SLC1A5，并调 节pCamk2/pDＲP1和NＲF2/GPX4轴诱导胃癌细胞铁死亡［8］。此外，槲皮素可通过调控Akt－mTOＲ信号传导和缺氧诱导因子1α(hypoxia－induciblefactor1α，HIF－1α)信号途径，激活自噬从而抑制胃癌发 展［9］。芦荟大黄素可通过调控人胃癌细胞MKN45的G0/G1期细胞进程，进而抑制胃癌细胞增殖［10］。β－谷甾醇可通过降低IL－17、TNF－α及MMP－9水平，抑制炎症反应，从而控制颅内动脉瘤的发展［11］;通过降低Bcl－2/Bax比值和损伤DNA，抑制SGC－7901胃癌细胞的增殖［12］。此外，β－谷甾醇可通过调控AMPK/PTEN/HSP90信号轴，抑制AGS人胃腺癌细胞增殖，从而阻遏异种移植小鼠模型肿瘤的生长［13］。不同体积分数的儿茶素可通过PI3K/Akt通路调节细胞周期，有效抑制胃癌细胞的增殖和迁移，并促进胃癌细胞死亡［14］。肿瘤发展的多细胞环境称为肿瘤微环境，包括免疫细胞、基质细胞、各种信号分子、周围血管以及细胞外基质。由于肿瘤微环境中除癌细胞外的细胞具有更稳定的遗传性质，肿瘤微环境比癌细胞更容易受到药物的影响，故研究人员希望通过靶向肿瘤·471·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322微环境的成分，在癌症治疗中产生更多的治疗优势。近年来，肿瘤微环境在肿瘤形成和耐药等方面的关键功能逐渐凸显［15］。除了免疫细胞，肿瘤微环境中诸多因 子 亦 发 挥 重 要 作 用，如TNF－α、IL－6、IL－1β、IL－17、NF－κB、MMP－9均为关键因子。TNF－α是一种由巨噬细胞/单核细胞在急性炎症期间产生的炎症细胞因子［16］，能诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞生长，并在一定范围内存在剂量效应关系［17］。TNFα和IL6均可直接杀伤或抑制肿瘤细胞生长［18］。TNF诱导坏死或凋亡细胞死亡的特征是细胞肿胀、细胞器破坏和细胞溶解，从而导致细胞促炎因子IL6、IL1β释放［19］，故细胞凋亡数量与炎症因子呈正相关。本研究结果显示，藤梨根可促进胃癌HCG－27细胞分泌TNF－α、IL－6、IL－1β，提示藤梨根可调控胃癌细胞的炎性微环境。IL－17是新型炎症细胞因子家族的成员之一，主要来源于Th17细胞和Tc17细胞，由六种结构相关的 细 胞 因 子IL17A(IL17)、IL17B、IL－17C、IL－17D、IL－17E(IL－25)和IL－17F组成［20］。研究发现，胃癌患者血清和癌组织中IL－17表达增加［21－22］，体外IL－17A处理可刺激胃癌细胞增殖并抑制其凋亡。IL－17A的受体IL－17Ｒ与NF－κB激活物1(Act1)特异性结合后，Act1通过其特异性序列募集各种TNF受体相关因子，从而启动NFκB通路［23］。NFκB通路可调控细胞增殖、细胞凋亡和血管生成等多种细胞过程［24］，与胃癌关系密切。IL17A可通过激活NFκB途径，上调MMP9水平，从而增强胃癌细胞的迁移和侵袭能力［25］。MMP的蛋白水解活性和表达水平与肿瘤的生长、局部侵袭和转移相关［26］。其中，MMP9在细胞迁移、恶性肿瘤侵袭转移等病理生理过程中发挥重要作用［26］。此外，研究表明IL17通过激活NF－κB信号通路，增加IL－6表达，从而促进胃癌的侵袭［27］。本研究显示，藤梨根能够抑制HGC－27细胞中IL－17A、NF－κB和MMP－9蛋白表达，提示藤梨根抑制胃癌细胞迁移、促进其凋亡的作用可能通过调控IL17通路实现。综上所述，藤梨根可能通过槲皮素、β谷甾醇、谷固醇等成分，调控IL－17信号通路，从而发挥抑制胃癌细胞迁移，并促进其凋亡的作用。参考文献:［1］HEFF，WANGSM，ZHENGＲS，etal．TrendsofgastriccancerburdensattributabletoriskfactorsinChinafrom2000to2050［J］．LancetＲegHealthWestPac，2024，44:101003．［2］周俊．胃癌治疗研究十年回顾和现状［J］．实用肿瘤杂志，2024，39(3) :202208．［3］匡子禹，王佳曦，曹璐畅，等．中医药治疗局部可切除胃癌的现状与思考［J］．辽宁中医杂志，2024，51(12) :211215［4］张广顺，张光霁，廖广辉，等．藤梨根总三萜化合物通过下调N－Cadherin、Snail抑制BGC－823胃癌细胞侵袭的体内外实验研 究［J］．中华中医药杂志，2016，31(4) :1188－1192．［5］申力，张光霁，张广顺，等．猕猴桃多糖对前胃癌MFC细胞及其原位移植瘤细胞凋亡的影响［J］．中草药，2014，45(5) :673－678．［6］LIJ，DAIC，SHENL．Ursolicacidinhibitsepithelial－mesenchymaltransitionthroughtheaxl/NFκBpathwayingastriccancercells［J］．EvidBasedComplementAlternatMed，2019，2019:2474805．［7］夏婷婷，王颖．藤梨根从“痰”论治恶性肿瘤的研究进展［J］．浙江中医药大学学报，2020，44(7) :702706．［8］DINGLX，DANGSW，SUNMJ，etal．QuercetininducesferroptosisingastriccancercellsbytargetingSLC1A5andregulatingthepCamk2/pDＲP1andNＲF2/GPX4Axes［J］．FreeＲadicBiolMed，2024，213:150163．［9］WANGK，LIUＲ，LIJY，etal．Quercetininducesprotectiveautophagyingastriccancercells:involvementofAkt－mTOＲ－andhypoxia－inducedfactor1α－mediatedsignaling［J］．Autophagy，2011，7(9) :966－978．［10］CHIHAＲAT，SHIMPOK，BEPPUH，etal．EffectsofAloe－emodinandemodinonproliferationoftheMKN45humangastriccancercellline［J］．AsianPacJCancerPrev，2015，16(9) :3887－3891．［11］YANGQ，YUDL，ZHANGY．β－sitosterolattenuatestheintracranialaneurysmgrowthbysuppressingTNF－α－mediatedmechanism［J］．Pharmacology，2019，104(5/6) :303311．［12］ZHAOYH，CHANGSKC，QUG，etal．BetasitosterolinhibitscellgrowthandinducesapoptosisinSGC7901humanstomachcancercells［J］．JAgricFoodChem，2009，57(12) :52115218．［13］SHINEJ，CHOIHK，SUNGMJ，etal．AntitumoureffectsofbetasitosterolaremediatedbyAMPK/PTEN/HSP90axisinAGShumangastricadenocarcinomacellsandxenograftmousemodels［J］．BiochemPharmacol，2018，152:60－70．·472·

2025年3月10日第3期No．310March2025中医学报ACTACHINESEMEDICINE第40卷总第322期Vol．40No．322［14］DINGY，LIH，CAOSS，etal．EffectsofcatechinonthemalignantbiologicalbehaviorofgastriccancercellsthroughthePI3K/Aktsignalingpathway［J］．ToxicolApplPharmacol，2024，490:117036．［15］YANGPZ，YANGWT，WEIZ，etal．Noveltargetsforgastriccancer:thetumormicroenvironment(TME) ，N6－methyladenosine(m6A) ，pyroptosis，autophagy，ferroptosisandcuproptosis［J］．BiomedPharmacother，2023，163:114883．［16］IDＲISSHT，NAISMITHJH．TNFalphaandtheTNFreceptorsuperfamily:structure－functionrelationship(s)［J］．MicroscＲesTech，2000，50(3) :184－195．［17］高友兵，熊静，李海波，等．肿瘤坏死因子－α诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究［J］．河南肿瘤学杂志，2002，15(6) :417418．［18］LIMAAC，AMOＲIMD，LAＲANJEIＲAI，etal．ModulatinginflammationthroughtheneutralizationofInterleukin6andtumornecrosisfactorαbybiofunctionalizednanoparticles［J］．JControlＲelease，2021，331:491502．［19］BEYAEＲTＲ，FIEＲSW．Molecularmechanismsoftumornecrosisfactorinducedcytotoxicity．Whatwedounderstandandwhatwedonot［J］．FEBSLett，1994，340(1/2) :9－16．［20］GUCF，WUL，LIXX．IL－17family:cytokines，receptorsandsignaling［J］．Cytokine，2013，64(2) :477－485．［21］陈锦霞，单保恩，李清靖，等．IL－17及其相关分子在胃癌组织中的表达和相关性分析［J］．肿瘤学杂志，2019，25(6) :537540．［22］周勇旭，张岩，张霞，等．胃癌患者血清IL17表达及与VEGF相关性分析［J］．哈尔滨医科大学学报，2018，52(4) :354357．［23］HUANGFULJ，LIＲY，HUANGYM，etal．TheIL－17familyindiseases:frombenchtobedside［J］．SignalTransductTargetTher，2023，8(1) :402．［24］HOESELB，SCHMIDJA．ThecomplexityofNF－κBsignalingininflammationandcancer［J］．MolCancer，2013，12:86．［25］NILANDS，ＲISCANEVOAX，EBLEJA．Matrixmetalloproteinasesshapethetumormicroenvironmentincancerprogression［J］．IntJMolSci，2021，23(1) :146．［26］WANGYD，WUH，WUXL，etal．Interleukin17ApromotesgastriccancerinvasivenessviaNFκBmediatedmatrixmetalloproteinases2and9expression［J］．PLoSOne，2014，9(6) :e96678．［27］牛世伟，龚红霞，付晓燕．IL17及其介导的信号通路在胃癌中的研究进展［J］．医学研究生学报，2022，35(6) :660663．收稿日期:20241201作者简介:曹洋(1999－) ，女，河南封丘人，硕士研究生，主要从事胃癌机制研究。通信作者:申力(1978－) ，女，天津人，医学博士，副研究员，主要从事中医方证基础研究。E－mail:shenli1116@126．com编辑:刘凯歌·473·